干货共享 脂滴？细胞器？-MedChemExpress

  脂滴 (Lipid droplets, LDs) 是一种呈球状的细胞器，也称为脂质体或油体。与其他细胞器不同，脂滴的外表是，在哺乳动物细胞中，脂滴单分子膜的主要成分是磷脂酰胆碱 (Phosphatidylcholine, PC)，高达60%，其次是磷脂酰、磷脂酰肌醇等[1] 。在磷脂膜上有超越 200 种不同的结构蛋白和功用蛋白定坐落 LDs 的外表，如 DGAT2、Rab18、脂滴包被蛋白[2,3] 。脂滴的中心是中性脂质，如三酰甘油酯 (Triacylglycerols, TAG) 和甾醇酯 (Sterol esters, SE) 等，堆积在脂滴中，在白色脂肪细胞中，TAG 主要以脂类酯的方式贮存在脂滴中，而在类固醇细胞中，SE 是主要成分，此外，依据细胞类型的不同，许多其他内源性中性脂质如视黄醇酯、醚脂质和游离胆固醇也贮存在脂滴核内[4] 。

  因为脂滴特别的亲水/疏水两性结构，科学家对其的产生一直在不断的进行中，现在广泛以为，在原核生物中，中性脂质的堆集是在质膜的特定脂质结构域开端的，最终构成了细胞质脂滴。在真核生物中，脂滴产生于内质网中的磷脂双分子层的小叶内，内质网双分子层之间累积的中性脂的体积添加超越了溶解度的极限，脂滴即从内质网双分子层中被油化出来[5,6] 。

  在原核生物中，中性脂质体的构成始于 WS/DGAT 附着在细胞质膜上，随后组成小脂滴，构成被单层 PLs 包裹的产油层。脂质体前体由 SLD 集合和交融构成，构成膜结合的脂质体前体，然后构成细胞质脂质体。真核生物的油体是由内质网膜的两个小叶之间的脂质渐进式堆集构成的，并可能有结构蛋白的共翻译刺进，然后构成出芽的油体并开释到细胞质中。

  许多生物在细胞中贮存脂质以产生代谢能量，以防能量来历缺乏。但脂滴不是简略的脂质贮存库，而是具有多种细胞功用的杂乱细胞器[7] 。除了在能量代谢中发挥效果外，脂滴也是细胞内和细胞间脂肪酸运送的重要节点，还在各种细胞事情中发挥效果，如蛋白质降解、阻隔转录因子和染色质成分以及为某些核受体生成脂质配体[8] 。此外，病毒核衣壳蛋白中心自身可与脂滴外表结兼并和谐病毒感染的继续传达[9] 。

  因为脂滴功用的多样性，其反常与许多病理状况相[10] 。因而，了解脂滴的生物学特性和功用便特别的重要。下面小 M 就来为咱们介绍一下脂滴常用的染料检测。

  脂质代谢改动和肾脏内的过度脂质堆积被以为是肾脏疾病发展的重要有害要素，据报道，自噬可经过诱导脂质分化和促进脂滴构成的双向机制参加脂代谢调控。

  油红O (Oil Red O) 染色是一种简略的定性办法，当油红 O 与脂滴触摸时,会当即进入细胞/安排内脂质中，使其染为赤色。

  过程(参阅)：1. 将肾安排或细胞玻片的冰冻切片在 PBS 中洗刷，多聚甲醛固定 30 min。2. 样品在 60% 异丙醇中孵育 3 min，然后用新鲜制备的 60% 油红 O 染色 30 min, 60% 异丙醇染色 1 min，用 PBS 洗刷。3. 样本用苏复染。切片运用显微镜进行可视化。4. 运用 Image J 软件依照规范程序对脂滴数量和巨细进行定量。

  除油红 O 染色以外，Nile Red 也是一种常用的荧光探针，能够定位及定量细胞内的脂质。如，在研讨未羧化骨钙素 (Uncarboxylated osteocalcin, GluOC) 对肝细胞效果的机制时，以油酸/棕榈酸 (Oleic acid/Palmitic acid, OA/PA) 诱导的细胞作为非酒精性脂肪性肝病细胞模型，经过 Nile Red 染色检测三酰甘油水平。成果显现，GluOC 降低了甘油三酯水平。标明 GluOC 按捺了 OA/PA 诱导的 NCTC 1469 细胞中的脂质堆集。

  Nile Red 又名尼罗红，是一种亲脂性的恶嗪类荧光探针，在水中和其他极性溶液中不发荧光，在非极性溶剂中呈现亮堂的赤色荧光，能够定位及定量细胞内的脂质。

  此外，BODIPY 类染料也是脂滴符号的染料，最大特点是其非对称性，能够很好的衔接符号基团(比方亲脂类结构)，穿过细胞膜进入细胞内部，经过在细胞内的极性脂类上定位以进行特异性染色。BODIPY 类染料可用于符号活细胞和固定细胞，还可用于光动力学疗法的研讨。

  如，研讨规划老练的脂肪细胞 (Apo) 包裹棕榈酸结合的雷公藤甲素衍生物 (pTP) 和光敏剂 Ce6 (pTP-Ce6-Apo)，用于黑色素瘤的光动力学医治。为讨论 pTP-Ce6-Apo 能否将脂肪细胞内的脂滴转运到 A375 细胞内，以及 pTP-Ce6-Apo 能否开释 Ce6 并被 A375 细胞吸取，运用 BODIPY 505/515 染色 pTP-Ce6-Apo。成果显现 A375 细胞周围散布着少数的脂滴，标明 A375 细胞能够从脂肪细胞中吸取脂滴并为自己所用。一起，A375 细胞核周围有少数赤色荧光为 Ce6，标明 Ce6 从 pTP-Ce6-Apo 中成功开释并被 A375 细胞吸取。

  BODIPY，也叫硼，BDP，是以硼二 (boron-dipyrromethene) 为荧光结构母核的染料。其对环境的极性和 pH 值相对不灵敏，因而，在不同生理条件下相对安稳。

  过程(参阅)：1. 将 BODIPY 符号的 pTP-Ce6-Apo 置于 Transwel l小室上层，A375 细胞玻片置于底层。共培育后，取出 A375 细胞片。2. 用多聚甲醛固定，避光后染色。3. 在激光共聚焦显微镜下调查制备的 A375 细胞片。

  下面是小 M 为咱们整的一些 Bodipy 类相关染料，便利咱们更好地进行脂质代谢相关研讨~

  尼罗红 (Nile Red) 是一种亲脂染色。它具有环境灵敏性荧光。尼罗红在富脂环境中荧光激烈，而在水介质中荧光弱小。它是荧光显微镜和流式细胞荧光法检测细胞内脂滴的极好的重要染色剂。尼罗红将细胞内脂滴染成赤色。荧光波长 559/635 nm。BETA-1

  BETA-1 是第一个分子内电荷转移集合诱导发射集成分子 (TICT-AIE integration molecule)。BETA-1 在脂滴 (LD) 中宣布青色荧光，在线粒体中宣布赤色荧光。BETA-1 可用于脂滴和线粒体在体内和体外的一起和双色成像。Oil Red O

  Oil Red O 是一种脂溶性重氮染料，最大吸收波长为 518 nm。Oil Red O 染色中性脂和胆固醇酯，但不染色生物膜。Oil Red O 在小鼠肝活检中可用于检测和定量肝脂肪变性。Oil Red O 染色能够轻松又有效地调查代谢疾病产生和发展时安排产生的根本变化。LipidGreen 2

  LipidGreen 2 是用于脂质成像的第二代小分子探针。与之前的 LipidGreen 比较，LipidGreen 2 具有更加好的荧光信号，能够挑选性地染色细胞中的中性脂质和活斑马鱼的脂肪堆积物。

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