亲脂性细胞膜染料： DiO DilRd

  DiR 是一种近红外染料，激起/发射波长为 754/778 nm，用于正向或逆向示踪各类细胞或安排，与 DiD 相同，DiR 本身荧光布景较低，也被用在活体成像中。

  Di 归于长链二烷基碳菁类染料，因其共同的结构使其具有极强亲脂性，可与脂溶性生物结构结合，在必定浓度下，可以对细胞膜进行彻底染色。

  Di 染料被激起后具有极高的淬灭系数和激起态寿数，在细胞与安排定位示踪中起到了极大效果。

  常见的 Di 染料包括 DiO、DiI、DiD、DiR，在被激起后构成不相同的色彩的荧光 (如图 1)。

  b）去除培育基，离心搜集细胞，参加 PBS 洗刷 2-3 次，每次 5 分钟。

  d）400 g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。再次参加 PBS 洗刷细胞 2-3 次，以充沛去除未进入细胞内的DiO。

  f）用无血清培育基或 PBS 重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。

  DiO 为绿色荧光染料，激起/发射波长为 483/501 nM，DiO 常被用于正向或逆向示踪各类细胞或安排。(但相较其他三种染料，DiO 染料荧光强度较弱，对某些固定的安排切片染色效果略差)。

  Xin Li 等人研讨了 CPCs (心脏祖细胞) 衍生的外泌体 (CPCs-Ex) 是不是可以运用 mTOR 信号通路来削减病毒性心肌炎的细胞凋亡。

  研讨人员用 DiO 对 CPCs-Ex 进行符号 (Dio 可经过选择性切割被归入细胞膜)，评价 H9C2 细胞对 CPCs-Ex 的体外吸取，荧光显微镜调查发现 H9C2 细胞的每个细胞质均包括荧光信号 (图 2)，并削减 H9C2 细胞的凋亡，确认了 CPCs-Ex 在 CVB3 感染细胞中的抗凋亡效果。

  DiI 为橙赤色荧光染料，激起/发射波长为 551/569 nM，DiI 被用于正向或逆向示踪各类细胞或安排，荧光信号强度高于 DiO，在进入细胞膜时，其荧光信号会被大幅度扩大。

  如图 4 所示，Dil 染料符号外泌体，然后与方针细胞共培育。运用共集合显微镜捕捉 HOS 细胞对 Dil 符号外泌体的吸取，其中被符号的外泌体宣布特异性橙赤色荧光。

  DiD 为一种赤色荧光染料，激起/发射波长为 646/663 nM，DiD 荧光信号高、不易淬灭、本身荧光搅扰低，不只用于细胞/安排染色，小动物活体成像中是最常用的。

  Yuxuan Fu 等人研讨出一种药物传输办法来到达抗新冠药物更好的进入靶器官的意图，研讨者运用 DiD 符号细胞外小泡 (EV) 病毒蛋白的受体结合域 (EV-RBD) ，并进行小鼠尾静脉注射，经过荧光成像可以正常的看到，信号首要在心脏、肺、肾脏中集合，并且有必要留意一下的是，在 96 h 时，符号的 EV-RBD 累积的荧光信号仍保留在肺安排中，这证明了该办法的可行性。

  DiR 是一种近红外染料，激起/发射波长为 754/778 nm，用于正向或逆向示踪各类细胞或安排，与 DiD 相同，DiR 本身荧光布景较低，也被用在活体成像中。

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